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GST pull-down


1.技术简介

GST pull-down实验是一个有效验证酵母双杂交系统的体外试验技术。将靶蛋白质-GST融合蛋白质亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上,作为与目的蛋白质亲和的支撑物,充当一种“诱饵蛋白质”,目的蛋白质溶液过柱,可从中捕获与之相互作用的“捕获蛋白质(目的蛋白质)”,洗脱结合物通过SDS-PAGE电泳分离,最后经western blot,从而证实两种蛋白质间的相互作用;“诱饵蛋白质”和“捕获蛋白质”均可通过细胞裂解物、纯化的蛋白质、表达系统以及体外转录翻译系统等方法获得。

2.实验原理
利用重组技术将PES1蛋白与GST(Glutathione S transferase)融合表达,融合蛋白通过GST与琼脂糖微球上结合的GTH(Glutathione)亲和结合。因此,如果PES1与NPM1之间有直接相互作用,当结合了PES1蛋白的GTH微球的与含有NPM1蛋白的细胞裂解液混合孵育,再通过离心富集GST微球,得到的样品中可以检测到NPM1。

3.实验目的
在体外检测NPM1 (nucleophosmin )与Pes1(pescadillo)之间的直接相互作用,确定PES1与NPM1相互作用的结构域。

4. 实验流程


5.技术服务

1)验证两种蛋白质间相互作用


2)验证目的蛋白与细胞裂解物蛋白互作


发布时间: 2016-01-28



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