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细胞免疫荧光(IF)



一、     技术简介

免疫荧光技术(immunofluorescence) 是将免疫学方法(抗原抗体特异结合)与荧光标记技术结合起来研究特异蛋白抗原在细胞内分布的方法。由于荧光素所发的荧光可在荧光显微镜下检出,从而可对抗原进行细胞定位。

二、     技术步骤

1.  固定:4%多聚甲醛,室温固定20 minPBS洗三次,每次3 min

2.  透膜:0.5% Triton X-100 in PBS,室温10 minPBS洗三次,每次3 min

3.  封闭:1%BSA in PBS,室温30 minPBS洗一次,3 min

4.  一抗:按照抗体说明书配制适当比例的一抗,室温1-2 h4 ℃过夜,PBS洗三次,每次5 min

5.  二抗:按照抗体说明书配制适当比例的二抗,室温1-2 hPBS洗三次,每次5 min

6.  细胞核染色:1 μg/mL DAPI,室温10 minPBS洗三次,每次5 min

7.  封片:2-3 μL抗淬灭剂封片;

8.  观察:用荧光显微镜观察结果。

三、     应用领域

1.  细胞免疫荧光

2.  组织免疫荧光



发布时间: 2016-01-27



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