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细胞行为学检测


一、细胞增殖

细胞增殖是生物体生长、发育、繁殖、遗传的基础,是细胞最基本的生理活动。生长因子、激素及癌基因产物等均可诱导细胞的增殖或抑制细胞的增殖,通过影响细胞周期的运行、细胞凋亡的改变而实现。常用实验方法如下:

1.  MTT检测细胞增殖

MTT为一种化合物,全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromideMTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法,其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫检测仪在 490nm波长处测定其光吸收值,在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比,因此MTT的吸光值可间接反映活细胞数量。该方法已广泛用于抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。

2.  CCK8检测细胞增殖

Cell Counting Kit-8(简称CCK-8)试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为:该试剂中含有WST-8【化学名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】,它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物(Formazan dye)。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析

3.  细胞计数

细胞计数是最经典的检测细胞增殖的方法之一。

实验实例


Figure legend.不同基因的过表达慢病毒感染细胞,继续培养三天后,收集对数期细胞,向96孔板每孔加入2000个细胞,细胞培养箱孵育至细胞贴壁,向孔板中加入CCK8溶液,并继续培养1h,酶标仪读取450nm的吸光值。

Figure legend.对不同处理的肿瘤细胞以相同细胞密度铺板,分别在第123天进行细胞计数,敲除目的基因组细胞增殖能力显著下降。

二、细胞侵袭与迁移检测

细胞迁移是细胞在接收到迁移信号或感受到某些物质的浓度梯度后而产生的移动。侵袭是指恶性肿瘤细胞在质和量方面异常地分布于组织间隙的现象,是肿瘤细胞粘连、酶降解、移动、基质内增殖等一系列过程的表现。肿瘤细胞的迁移与侵袭是其转移的前奏,转移则是肿瘤细胞迁移与侵袭的继续和结果。划痕实验、Transwell实验可用来检测细胞的迁移能力和侵袭能力。

实验实例:

   划痕实验:细胞培养于培养皿中,待细胞达到80%-90%饱和度后,在中央区域划线,换低血清培养基培养,定时观测细胞向划痕部位迁移的情况,以对细胞的迁移能力进行分析。

Figure legend.肿瘤细胞在不同时间点的愈合情况,反映出该细胞的侵袭能力。

Transwell实验:通常将细胞接种在Transwell小室中,下室加入诱导剂或趋化因子,细胞在浓度梯度诱导下,穿过滤膜向下室迁移,分别在16244048H取出小室,甲醇固定30min,结晶紫染色20min后于显微镜下拍照,统计已穿过细胞数来判断细胞的侵袭能力。

Figure legend.肿瘤细胞在不同时间点迁移细胞数对比,反映出该细胞的迁移能力。




发布时间: 2016-01-27



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